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PCR擴增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)

瀏覽次數:578發(fā)布日期:2023-01-18
  PCR擴增試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù):在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈,反應體系中的重組酶、單鏈DNA結合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴增反應。本試劑盒在42?C下,依賴(lài)核酸外切酶的作用,加入根據模版設計的特異的分子探針,使用熒光監測設備能實(shí)現對目標片段擴增過(guò)程的實(shí)時(shí)監控。適用于實(shí)驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。
 
  PCR擴增試劑盒操作需要提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻。
 
  1)每個(gè)干粉反應管加入29.4μLAbuffer(注意:Abuffer需融化混勻,否則會(huì )對實(shí)驗效果產(chǎn)生影響);
 
  2)每個(gè)反應管分別加入2μL上游引物、2μL下游引物和0.6μL探針(引物和探針濃度為10μM,對于多個(gè)反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中);
 
  3)向反應管中依次加入11.5μLddH2O和2μL核酸模板(可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積,并相應調整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為13.5μL);
 
  4)向反應管中加入2.5μLBbuffer并充分混合(對于多個(gè)反應,建議將Bbuffer加至反應管的蓋子內側,上下顛倒反應管8-10次混勻);
 
  5)混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應管放入熒光檢測設備中。熒光檢測程序設置為:恒溫42C;每30s采集一次FAM通道(信號采集通道的選擇與熒光探針設計一致)熒光值;反應時(shí)間20mins。
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